一个来自平行宇宙的、已经黑化的彼得·帕克，来到主宇宙追杀所有“善良的蜘蛛侠”。
在编号为TRN-688的黑暗宇宙中，彼得·帕克因梅婶被杀、玛丽·简离开而彻底黑化，成为“夜蛛”，以暴制暴杀光了所有反派。但他还不满足，认为其他宇宙的蜘蛛侠“太软弱”，于是在金并的帮助下穿越多元宇宙，猎杀其他蜘蛛侠。主宇宙的彼得·帕克（新人演员）刚刚成为蜘蛛侠三个月，还在为期末考试和抓小偷烦恼。他被迫迎战这位经验丰富且残忍的前辈。在一次次被碾压后，他只能求助其他宇宙的格温蜘蛛侠和暗影蜘蛛侠。最终决战，主宇宙彼得打不过夜蛛，但他没有选择杀死对方，而是让他看到了自己宇宙中活着的梅婶和幸福生活的玛丽·简。夜蛛崩溃自尽，临死前说“保护好她们”。
蜘蛛侠系列最暗黑、最成人向的一部。反英雄设定大胆，动作场面暴力且流畅。结尾的“不杀原则”以如此悲壮的方式呈现，动摇了传统超英片根基。
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